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By DIVULGO|diagnóstico 06 Noviembre 2022

Tras la pandemia por COVID-19 ha quedado demostrada la importancia de los métodos de diagnóstico para conseguir frenar una enfermedad. El diagnóstico ya surgió en la antigüedad, con Hipócrates o Galeno, y es un acto que toda la población tiene asumido en el entorno médico y hospitalario, pero el conocimiento de las técnicas que se usan frecuentemente va más allá de las ideas preconcebidas que pueda tener la gente. En los últimos años han sido conocidas por la población mundial técnicas como la PCR (reacción en cadena de la polimerasa) o un test rápido (ensayos de flujo lateral) de antígeno o anticuerpo. Y es más, se ha tenido acceso a ellos para su auto uso en casa.

La necesidad de frenar la enfermedad ha hecho que se desarrollasen y produjesen test en un breve tiempo, lo que ha dado un gran empuje a los mencionados ensayos de flujo lateral, fáciles de usar, y con un coste relativamente bajo, y al alcance de la gran mayoría.

Esto es posible gracias a los métodos de diagnóstico inmunológicos. ¿Pero qué es el diagnóstico inmunológico? ¿En qué se basa? ¿Para qué sirve? Veamos una breve introducción a los métodos que podrás ir encontrando más desarrollados en otras entradas de esta web.

Los métodos inmunológicos son los que se basan en la reacción antígeno-anticuerpo. Se pueden clasificar según la técnica usada o según el tipo de análisis a realizar. No hay una técnica mejor que otra, sino una más adecuada al analito a detectar. En este post nos centraremos en comentar los métodos clásicos. En general se puede hablar de:

Reacciones de precipitación: se trata de la formación de precipitados de antígeno-anticuerpo cuando éstos se combinan en proporciones cercanas al punto de equivalencia. Es necesario que el antígeno sea polivalente, es decir, posea más de un epítopo o sitio de unión con el anticuerpo. Estos precipitados son observables a simple vista y por ello inicialmente era una técnica de carácter cualitativo, pero la complejidad de algunas muestras de antígeno para analizarse por difusión, hizo necesario el desarrollo de métodos de difusión radial o la inmunoelectroforesis, que separan los antígenos según su carga eléctrica, aplicando un diferencia de potencial, para visualizarse posteriormente por precipitación, y además, pueden cuantificarse.

Reacciones de aglutinación y fijación de complemento: se basan en la capacidad de un antígeno unido a su anticuerpo complementario de aglutinar y dar lugar a agregados visibles al ojo humano. Estas reacciones de se pueden aplicar para la detección de anticuerpos presentes en muestras de pacientes sensibilizados con antígenos específicos (aglutinación directa) o, emplear un anticuerpo específico para detectar antígenos solubles en la muestra (aglutinación indirecta). En la aglutinación directa los antígenos en suspensión reaccionan con anticuerpos específicos formando inmunocomplejos y por ende una malla, mientras que en la aglutinación indirecta, los antígenos se fijan a partículas sólidas como partículas de látex o eritrocitos (hemaglutinación).

Técnicas de radioinmunoensayo (RIA): se denominan así porque se basan en el uso de isótopos radioactivos, siendo los más comúnmente usados I125 y I133. Pueden ser de inhibición o de tipo sándwich y clásicamente se han usado para la determinación de hormonas por su alta sensibilidad. El principio es la inhibición competitiva de la unión de un antígeno radioactivo (trazador) con su anticuerpo específico por parte de un antígeno no marcado. A mayor cantidad de antígeno no marcado, menor será la cantidad de trazador que se une al anticuerpo. Este trazador libre se cuantifica por recuento de centelleo (medio líquido) o recuento gamma (medio sólido). Las desventajas de esta metodología se basan en la seguridad, ya que es necesario usar protección para la radicación, y además la vida media de los isótopos radioactivos es corta, aunque como ventajas destaca su alta sensibilidad y especificidad y estabilidad frente a la interferencia ambiental.

Reacciones con inmunoglobulinas marcadas: en este tipo de ensayos se engloban reacciones de inmunofluorescencia, reacciones inmunoenzimáticas, reacciones de quimioluminiscencia o ensayos de flujo lateral, por ejemplo.

Las reacciones de inmunofluorescencia (IFA) usan un conjugado marcado con un fluorocromo que, al incidir la luz a una determinada longitud de onda, se excita y emite luz fluorescente. Por su parte las reacciones inmunoenzimáticas (EIA) usan reactivos marcados con enzimas para detectar tanto antígenos como anticuerpos. Son técnicas sensibles y relativamente poco costosas. La enzima se encuentra unida covalentemente al antígeno o el anticuerpo y debe producir un compuesto soluble si se realiza en medio acuoso (ELISA), o insoluble si se realiza sobre soportes sólidos (Western, Dot- o Line-Blot). En los inmunoensayos de quimioluminiscencia (CLIA) se utilizan sondas (o moléculas) que generan quimioluminiscencia, como son los derivados del luminol (requiere OH/H2O2), ésteres de acridinio o derivados del nitrofenil oxalato y tribipridil rutenio. El tiempo de emisión es del orden de segundos, siendo una técnica más rápida que el radioinmunoensayo, además de mayor sensibilidad. Puede ser útil con moléculas pequeñas como hormonas o haptenos. En los ensayos de flujo lateral una partícula libre (oro coloidal, poliestireno, partículas magnéticas, etc.), que lleva unido un detector (antígeno o anticuerpo), forma un complejo con un agente de captura (antígeno o anticuerpo) que está inmovilizado sobre la superficie de una membrana porosa. Pueden ser tipo sándwich o de inhibición, dependiendo del tamaño de la partícula a detectar.

References

  1. Henry, J. B., s.f. Laboratorio en el Diagnóstico Clínico. Ed. Marbán.
  2. Hernández, F. J. I., 2018. Fundamento de los test inmunológicos en las determinaciones más comunes de un laboratorio de farmacia. En: Temario Procedimientos Diagnóstico Clínico y Ortoprotésico Vol. I., pp. 494-513.
  3. Roitt, I., Brostoff, J. & Male, D., 1997. Capítulo 28. Técnicas Inmunológicas. En: Inmunología. Madrid: Harcourt Brace de España, S.A., pp. 28.1-28.15.
  4. Wong, R. C. & Tse, H. Y. edits., 2009. Lateral Flow Immunoassay. New YorK City: Humana Press, Springer.

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Con más de 20 años de experiencia en el desarrollo de técnicas de diagnóstico humano, hemos creado esta web con el objetivo de presentar y dar a conocer una recopilación de información, técnicas, métodos, actualidad y noticias sobre el mundo del diagnóstico humano o animal, que tan necesario se ha mostrado en los últimos años y lleva siéndolo desde hace muchos más. El objetivo es divulgar y llevar a todo el público que pueda estar interesado, información y curiosidades acerca del diagnóstico. Esperamos que lo disfrutéis y sobre todo que sea de utilidad.
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